본 발명은 동물의 고막 천공시 고막을 열손상시키는 단계, 상기 고막의 천공 부위에 미토마이신을 처리하는 단계 및 상기 미토마이신 처리된 고막에 덱사메타손을 처리하는 단계를 포함하는 만성 고막 천공 동물모델 제작방법, 이 방법에 의해 제작된 만성 고막 천공 동물모델, 및 이를 이용한 만성 고막 천공 치료제 또는 만성 중이염 후보물질 스크리닝 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 최소 8주 이상 고막 천공상태를 유지되는 고막 천공동물모델을 수득할 수 있으므로 만성 고막 천공의 과정, 고막재생에 관련된 줄기세포 분포, 및 재생과정 등에 관한 연구에의 획기적인 발전에 기여할 수 있을 것으로 기대된다.