본 발명은 나노입자의 독성 평가방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 나노입자에 노출된 포유동물의 조직 또는 세포 샘플을 얻는 단계; 상기 샘플 내에서 글루탐산 함량, 피루베이트 함량, 세포 내 미토콘드리아 손상여부, ROS(활성산소종) 함량, 및 ATP 함량;으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 조사하는 단계; 및 대조군과 비교하는 단계;를 포함하는 나노입자의 독성 평가방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 나노입자의 독성 평가방법은 나노입자의 독성과 높은 연관성을 갖는 인자를 분석함으로서, 이를 이용하면 나노입자의 독성 여부를 보다 정확하게 우수한 검출 감도로 확인할 수 있으며, 이를 통해 나노입자의 유해성을 모니터링 하거나 평가하는데 유용하게 사용될 수 있고, 나노입자에 노출시 유발되는 각종 질병이나 건강에 미치는 영향 등을 규명하는 도구로 유용하게 이용될 수 있다.